Russian Journal of Biological Physics and Chemisrty Russian Journal of Biological Physics and Chemisrty АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ФИЗИКИ И ХИМИИ 2499-9962 54071 БИООРГАНИЧЕСКАЯ, БИОФИЗИЧЕСКАЯ И МЕДИЦИНСКАЯ ХИМИЯ BIOORGANIC, BIOPHYSICAL AND MEDICINAL CHEMISTRY БИООРГАНИЧЕСКАЯ, БИОФИЗИЧЕСКАЯ И МЕДИЦИНСКАЯ ХИМИЯ BIOLUMINESCENT METHOD FOR RAPID ESTIMATION OF VIABLE MICOBACTERIA IN LYOPHILISED BCG VACCINE БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ МЕТОД БЫСТРОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ МИКОБАКТЕРИЙ В ЛИОФИЛИЗОВАННОЙ БЦЖ ВАКЦИНЕ Угарова Н Н Ugarova N N nugarova@gmail.com Ломакина Г Ю Lomakina G Yu Черников С В Chernikov S V Винокурова Н В Vinokurova N V Отрашевская Е В Otrashevskaya E V Перевышина Т А Perevyshina T A Горбачев В Ю Gorbachev V Y Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова; ООО «Люмтек» ru Lomonosоv Moscow State University; LLC «Lumtek» ru Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова; ООО «Люмтек» ru Lomonosоv Moscow State University; LLC «Lumtek» ru ФГУП НПО «Микроген» Минздрава России ru FSUC «SIC «Microgen» MOH RF ru ФГУП НПО «Микроген» Минздрава России ru FSUC «SIC «Microgen» MOH RF ru ФГУП НПО «Микроген» Минздрава России ru FSUC «SIC «Microgen» MOH RF ru ФГУП НПО «Микроген» Минздрава России ru FSUC «SIC «Microgen» MOH RF ru ФГУП НПО «Микроген» Минздрава России ru FSUC «SIC «Microgen» MOH RF ru 25 12 2016 25 12 2016 1 2 86 90 20 12 2016 20 12 2016 https://rusjbpc.ru/en/nauka/article/54071/view

Модифицирован и оптимизирован метод определения жизнеспособности клеток в лиофилизованной БЦЖ вакцине путем измерения содержания внутриклеточного АТФ. Содержание АТФ определяли биолюминесцентным методом с использованием АТФ-реагента (люциферин/люциферазы). По сравнению с АТФ-методом, опубликованным ранее, мы изменили условия реконструкции и предварительной инкубации лиофилизованной БЦЖ вакцины, а также условия экстракции внутриклеточного АТФ. Это позволило сократить длительность анализа с 36 до 2-х часов, упростить процедуру анализа и сделать ее более пригодной для практического применения. Наблюдалась высокая корреляция между содержанием АТФ и величиной КОЕ, определенной стандартным методом посевов.

An assay for quantifying viability in lyophilized BCG vaccine by determining intracellular ATP content was modified and optimized. ATP content was assayed by measuring bioluminescence signal in the presence of ATP- reagent (luciferin/luciferase). In comparison with the ATP-method published before, we changed conditions of lyophilized BCG reconstitution and pre-incubation, as well as that of the ATP extraction. It permitted to decrease the duration of the assay procedure from 36 to 2 hours and to make the assay more simple and suitable for practical application. A high correlation between ATP content and the viable count (CFU) was found.

 биолюминесценция АТФ-метод жизнеспособность клеток лиофилизованная БЦЖ вакцина bioluminescence ATP assay cell viability lyophilised BCG vaccine

Lomakina G.Yu., Modestova Yu.A., Ugarova N.N. Bioluminescence assay for cell viability. Biochemistry (Moscow), 2015, vol. 80, pp. 701-713. Lomakina G.Yu., Modestova Yu.A., Ugarova N.N. Bioluminescence assay for cell viability. Biochemistry (Moscow), 2015, vol. 80, pp. 701-713. Janaszek W., Aleksandrowicz J., Sitkiewicz D. The use of the firefly bioluminescent reaction for the rapid detection and counting of mycobacterium BCG. J. Biol. Stand., 1987, vol. 15, pp. 11-16. Janaszek W., Aleksandrowicz J., Sitkiewicz D. The use of the firefly bioluminescent reaction for the rapid detection and counting of mycobacterium BCG. J. Biol. Stand., 1987, vol. 15, pp. 11-16. Jensen S.E., Hubrechts P., Klein B.M., Haslow K.R. Development and validation of an ATP method for rapid estimation of viable units in lyophilized BCG Danish 1331 vaccine. Biologicals, 2008, vol. 36, pp. 308-314. Jensen S.E., Hubrechts P., Klein B.M., Haslow K.R. Development and validation of an ATP method for rapid estimation of viable units in lyophilized BCG Danish 1331 vaccine. Biologicals, 2008, vol. 36, pp. 308-314. Ho M.M., Markey K., Rigsby P., Jensen S.E., Gairola S., Seki M., Castello-Branco L.R., Lopez-Vidal Y., Knezevic I., Corbel M.J. Report of an international collaborative study to establish the suitability of using modified ATP assay for viable count of BCG vaccine. Vaccine, 2008, vol. 26, pp. 4754-4757. Ho M.M., Markey K., Rigsby P., Jensen S.E., Gairola S., Seki M., Castello-Branco L.R., Lopez-Vidal Y., Knezevic I., Corbel M.J. Report of an international collaborative study to establish the suitability of using modified ATP assay for viable count of BCG vaccine. Vaccine, 2008, vol. 26, pp. 4754-4757.