Russian Journal of Biological Physics and Chemisrty Russian Journal of Biological Physics and Chemisrty АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ФИЗИКИ И ХИМИИ 2499-9962 54282 Общая биофизика General biophysics Общая биофизика EFFECTS OF PHOSPHATE ON PROTEIN EB1 INTERACTION WITH MICROTUBULE ВЛИЯНИЕ ФОСФАТА НА ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ БЕЛКА ЕВ1 С МИКРОТРУБОЧКОЙ Саранцева М Ю Sarantseva M Y msarantseva@mail.ru Бояхчян А В Boyakhchyan A V Гудимчук Н Б Gudimchuk N B Московский государственный университет им. М.В.Ломоносова ru Lomonosov Moscow State University ru Московский государственный университет им. М.В.Ломоносова ru Lomonosov Moscow State University ru Московский государственный университет им. М.В.Ломоносова ru Lomonosov Moscow State University ru 25 06 2018 25 06 2018 3 2 290 295 20 06 2018 20 06 2018 https://rusjbpc.ru/en/nauka/article/54282/view

Данная работа посвящена исследованию взаимодействие белка из семейства ЕВ (End Binding protein) с микротрубочками (МТ) in vitro . Согласно одной из гипотез, он имеет повышенное сродство к комплексу «тубулин-ГДФ-фосфат», откуда следует, что повышение концентрации неорганического фосфата в растворе должно увеличить аффинность EB1 к МТ. Чтобы проверить данное предположение, проведены эксперименты по наблюдению кинетики накопления рекомбинантного белка ЕВ1-еGFP на стабильных МТ с помощью TIRF микроскопии (Total Internal Reflection Fluorescence) в присутствии таксола, подавляющего деполимеризацию МТ. Так же произведены измерения динамических параметров МТ и размера области связывания ЕВ1-еGFP с динамическими МТ. Сравнивая эти данные, полученные при разной концентрации дигидрофосфата натрия в растворе, можно делать выводы о влиянии фосфата на аффинность ЕВ1 к МТ, а значит, и о механизме их взаимодействия. Результаты исследования свидетельствуют против гипотезы о том, что EB1 связывается с ГДФ-фосфат-тубулином

This paper is devoted to investigation of the interaction of a protein from the EB family (End Binding protein) with microtubules (MT) in vitro . According to one of the hypotheses, it has an enhanced affinity for the «tubulin-GDF-phosphate» complex, suggesting that the addition of inorganic phosphate to solution should increase the affinity of EB1 to MT. To test this assumption, we conducted experiments to observe the kinetics of accumulation of recombinant EB1-eGFP protein on stable MTs using TIRF microscopy (Total Internal Reflection Fluorescence) in the presence of taxol, which suppresses the depolymerization of MT. Moreover, the dynamic MT parameters and the size of the binding region of EB1-eGFP with dynamic MTs were measured. Comparing these data obtained at different concentrations of sodium dihydrogen phosphate in solution, one can draw conclusions about the effect of phosphate on the affinity of EB1 to MT, and therefore on the mechanism of their interaction. The results of this study evidence against the hypothesis that EB1 binds to GDF-phosphate-tubulin

 микротрубочки ГТФ-шапочка ЕВ 1 MAPs microtubules GTP-cap

Komarova Y. [et al.] Mammalian end binding proteins control persistent microtubule growth. J.Cell Biol., 2009, vol. 184, pp. 691-706. Komarova Y. [et al.] Mammalian end binding proteins control persistent microtubule growth. J.Cell Biol., 2009, vol. 184, pp. 691-706. Maurer S.P., Fourniol F.J., Bohner G., Moores C.A., Surrey T. EBs recognize a nucleotide-dependent structural cap at growing microtubule ends. Cell, 2012, vol. 149(2), pp. 371-382. Maurer S.P., Fourniol F.J., Bohner G., Moores C.A., Surrey T. EBs recognize a nucleotide-dependent structural cap at growing microtubule ends. Cell, 2012, vol. 149(2), pp. 371-382. Maurer S.P., Cade N.I., Bohner G., Gustafsson N., Boutant E. Surrey T. EB1 accelerates two conformational transitions important for microtubule maturation and dynamics. Current Biology: CB, 2014, 24(4), pp. 372-384. Maurer S.P., Cade N.I., Bohner G., Gustafsson N., Boutant E. Surrey T. EB1 accelerates two conformational transitions important for microtubule maturation and dynamics. Current Biology: CB, 2014, 24(4), pp. 372-384. Maurer S.P., Bieling P., Cope J., Hoenger A., Surrey T. GTPγS microtubules mimic the growing microtubule end structure recognized by end-binding proteins (EBs). Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2011, vol. 108(10), pp. 3988-3993. Maurer S.P., Bieling P., Cope J., Hoenger A., Surrey T. GTPγS microtubules mimic the growing microtubule end structure recognized by end-binding proteins (EBs). Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2011, vol. 108(10), pp. 3988-3993. Zhang R., Alushin G.M., Brown A., Nogales E. Mechanistic Origin of Microtubule Dynamic Instability and Its Modulation by EB Proteins. Cell, 2015, vol. 162(4), pp. 849-859. Zhang R., Alushin G.M., Brown A., Nogales E. Mechanistic Origin of Microtubule Dynamic Instability and Its Modulation by EB Proteins. Cell, 2015, vol. 162(4), pp. 849-859. Zaytsev A.V., Mickb J.E., Maslennikov E., Nikashina B., DeLucab J.G., Grishchuk E.L. Multisite phosphorylation of the NDC 80 complex gradually tunes its microtubule-binding affinity. Molecular Biology of the Cell, 2015, vol. 26, pp. 1829-44. Zaytsev A.V., Mickb J.E., Maslennikov E., Nikashina B., DeLucab J.G., Grishchuk E.L. Multisite phosphorylation of the NDC 80 complex gradually tunes its microtubule-binding affinity. Molecular Biology of the Cell, 2015, vol. 26, pp. 1829-44.