Изучено влияние амилоидных фибрилл на структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов человека in vitro . Контроль за процессом образования амилоидных фибрилл из лизоцима куриного яйца осуществляли флуоресцентным методом с использованием тиофлавина Т. Эксперименты проведены на эритроцитах крови практически здоровых доноров. Клетки инкубировали в растворе, содержащем амилоидные фибриллы, затем из них выделяли изолированные эритроцитарные мембраны. О структурном состоянии мембран эритроцитов человека судили по степени везикуляции клеток при их метаболическом истощении, модификацию белков эритроцитарных мембран оценивали по параметрам флуоресценции зондов N-(1-пирен) малеимида (ПМ), отражающего уровень сульфгидрильных групп, и 4-4,-диацетамидо-2,2,-стильбендисульфоната (ДИДС), специфически связывающегося с белком полосы 3. В качестве контролей использовали эритроциты, проинкубированные при таких же условиях в среде, содержащей нативный лизоцим, а также в среде, не содержащей белковых компонентов. Обнаружено, что трехчасовая инкубация клеток в растворе, содержащем амилоидные фибриллы из лизоцима, приводит к ускорению процесса везикуляции эритроцитов при их метаболическом истощении, снижению интенсивности флуоресценции специфического к SH-группам белков N-1-(пирен) малеимида и связанного с белком полосы 3 4-4,-диацетамидо-2,2,-стильбендисульфоната, по сравнению с контрольными клетками. Полученные результаты позволяют сделать вывод, что амилоидные фибриллы, полученные из лизоцима, воздействуя на эритроциты человека in vitro , вызывают модификацию структурного состояния их мембран, проявляющуюся в повышении отделения от эритроцитов части мембранного материала - везикул, снижении уровня белковых SH-групп и модификации структурного состояния белка полосы 3 в мембранах эритроцитов человека.
The effect of amyloid fibrils on the structural and functional state of human erythrocyte membranes in vitro was studied. The process of the formation of amyloid fibrils from hen egg lysozyme was monitored by the fluorescence method with a specific thioflavin T probe. Experiments were carried out on the blood erythrocytes of virtually healthy donors. Cells were incubated in a solution containing amyloid fibrils, then erythrocyte membranes were isolated from the cells. The structure of human erythrocyte membranes was estimated by the degree of cell vesiculation under metabolic depletion, protein modification of erythrocyte membranes was assessed by the fluorescence parameters of N- (1-pyrene) maleimide (PM) probes, reflecting the level of sulfhydryl groups, and 4-4, -diacetamide 2,2, -stilbendisulphonate (DIDS), specifically binding to protein of lane 3. Erythrocytes incubated under the same conditions in medium containing intact lysozyme, as well as in medium devoid of protein components were used as the controls. A three-hour incubation of cells in a solution containing amyloid fibrils from lysozyme was found to accelerate the erythrocyte vesiculation process upon their metabolic depletion, decrease the fluorescence intensity of the protein SH-groups-specific N-1- (pyrene) maleimide and lane 3 protein associated 4-4, -diacetamido-2,2, -stilbendisulphonate, compared with control cells. The results allow us to conclude that amyloid fibrils obtained from lysozyme, when acting upon human erythrocytes in vitro, cause a modification of their membrane structure, which manifests in an increase in the separation of the membrane material from the red blood cells - vesicles, a decrease in the level of protein SH-groups and modification of the lane 3 protein structure in human erythrocyte membranes.