В последнее время актуально использование патогенных вирусов для борьбы с раковыми клетками, в том числе аденовирусов. Культура клеток линии карциномы шейки матки (HeLa) является популярной моделью для исследования факторов, влияющих на показатели жизнеспособности онкоклеток. Целью данной работы является исследование транмембранных потенциалов (ТМП) и энергетической активности митохондрий в клетках HeLa чистой культуры в процессе их размораживания и культивирования после инфицирования аденовирусом. Для оценки цитофизических показателей использовали полихроматический флуоресцентный зонд 4-n-диметиламностирил-1-метилпиридиний (ДСМ). Микрофлуорметрические исследования показали, что высокий уровень отрицательного ТМП ≥ |-150| mv, достигается через 6 - 12 ч, а максимальный ТМП ≥ |- 200| mv - через 24 ч после размораживания и культивирования чистых клеток. Размножение аденовируса в клетках культуры HeLa приводит к деэнергизации митохондрий, к изменению электрических и структурных свойств клеточных мембран и ядерного хроматина, в итоге к нарушению жизнеспособности раковых клеток.
культура клеток HeLa, аденовирусная инфекция, криоконсервация, трансмембранные потенциалы, активность митохондрий, флуоресцентный зонд ДСМ
1. Подчерняева Р.Я., Корнилаева Г.В., Морозова Г.И. Новый подход к методам крио и деконсервации для сохранения генофонда коллекции клеточных культур. Цитология, 2004, т. 46, № 9, с. 837 @@Podchernyaeva R.Y., Kornilaeva G.V., Morozova G.I. New approach to cryopreservation and deconservation methods for preservation of gene pool of cell culture collection. Cytology, 2004, vol. 46, no. 9, p. 837. (In Russ.)
2. Разумов И.А., Святченко В.А. Протопопова Е.В., Кочнева Г.В., Киселёв Н.Н. и др. Оценка онколитической активности ряда ортопоксвирусов, аденовирусов и парвовирусов в отношении клеток глиом человека. Вестник РАМН, 2013, № 12, с. 4-8. @@Razumov I.A., Svyatchenko V.A. Protopopova E.V., Kochneva G.V., Kiselev N.N. et al. Oncolytic evaluation of a number of orthopoxviruses, adenoviruses and parvoviruses against human glioma cells activity. RAMS Bulletin, 2013, no. 12, pp. 4-8. (In Russ.)
3. Toshakov V.G., Morozova G.I., Onishchenko N.A. Energy metabolism of cryopreved rad hepatocytes. Cryo-letters, 1991, no. 12, рр. 259-272.
4. Лопатина О.А., Морозова Г.И., Подчерняева Р.Я., Фирсова Е.Л., Данлыбаева Г.А., Михайлова Г.Р., Бакланова О.В. Энергетическое состояние клеток Mpf после криоконсервации. Биофизика живой клетки. Пущино: РАН, ИБФ, 2008, т. 9, с. 84-85. @@Lopatina O.A., Morozova G.I., Podchernyaeva R.Ya., Firsova E.L., Danlybaeva G.A., Mikhailova G.R., Baklanova O.V. Energy state of Mpf cells after cryopreservation. Biofizika zhivoj kletki. Pushchino: RAS, IBF, 2008, vol. 9, pp. 84-85. (In Russ.)
5. Parkhomenko T.V, Galibin O.V., Verbitskaya E.V, Tomson V.V. Evaluation of energy potential of fresh and stored bone marrow cells using a fluorescent potential-sensitive probe. Cellular Therapy and Transplantation (CTT), 2016, vol. 5, no. 2(15), pp. 60-65.
6. Морозова Г.И., Добрецов Г.Е., Дубуре Р.Р., Дубур Г.Я., Голицын В.М., Владимиров Ю.А. Флуоресценция зонда 4-(n-диметиламиностирил)-1-метилпиридиния в живой клетке. Цитология, 1981, т. 23, № 8, с. 916-923. @@Morozova G.I., Dobretsov G.E., Dubur R.R., Dubur G.Ya., Golitsyn V.M., Vladimirov Yu.A. Fluorescence of 4- (n-dimethylaminostyryl) -1-methylpyridinium probe in a living cell. Cytology. 1981, vol. 23, no. 8, pp. 916-923 (In Russ.)
7. Добрецов Г.Е., Косников В.В., Морозова Г.И., Лихачева Л.М., Айдыралиев Р.К., Владимиров Ю.А. Измерение градиента концентрации флуоресцентного зонда - катиона ДСМ на цитоплазматической и митохондриальной мембранах. Биологические мембраны, 1986, т. 3, № 3, с. 266-273. @@Dobretsov G.E., Kosnikov V.V., Morozova G.I., Likhacheva L.M., Aidaraliev R.K., Vladimirov Yu. A. Measurement of the concentration gradient of the fluorescent probe - cation DSM on the cytoplasmic and mitochondrial membranes. Biological membranes, 1986, vol. 3, no. 3, pp. 266 -273. (In Russ.)
8. Морозова Г.И., Онищенко Н.А., Оржеховская И. Г., Коробкова Е. Н., Полосина О. В., Базиева Ф.Х., Баукина О.В. Микрофлуориметрический метод идентификации и оценка физиологического состояния лимфоцитов и нейтрофилов в цельной нативной крови с помощью флуоресцентного зонда-катиона ДСМ: клиника и эксперимент. Гематология и трансфузиология, 1997, т. 42, № 3, с. 43-47. @@Morozova G.I., Onishchenko N.A., Orzechowska I.G., Korobkova E.N., Polosin V.O., Baziyeva F.H., Baukina O.V. Microfluorimetric identificaition and assessment of the physiological state of lymphocytes and neutrophils in whole native blood by means of fluorescent probe-cation DSM: clinical and experimental data. Gematal. Transfuziol., 1997, vol. 42, no. 3, pp. 43-47. (In Russ.)
9. Morozova G.I., Parkhomenko T.V., Klitsenko O.A., Tomson V.V. Stimulating Effect of Erythropoietin on Thymocyte Energetics Established in vitro with Potential-sensitiv Fluorescent Probe. Biochemistry Supple-ment Series A: Membrane and Cell Biology, Moscow: 2008, vol. 1, no. 4, pp. 325-330.
10. Тарнопольская О.В., Непомнящая Е.М., Бирбраер В.М., Тюрбеева М.Л., Макарова Е.И. Средний мембранный потенциал клеток опухолей пяти гистотипов. Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований, 2014, № 10, с. 108-109. @@Tarnopolskaya O.V., Nepomnyaschaya E.M., Birbraer V.M., Tyurbeeva M.L., Makarova E.I. Average membrane potential of five histotypes tumor cells.International Journal of Applied and Basic Research, 2014, no. 10, pp. 108-109 (In Russ.)
11. Морозова Г.И. Лопатина О.А., Михайлова Г.Р., Данлыбаева Г.А., Подчерняева Р.Я. Сравнительное исследование эффектов частотно-резонансных воздействий и голографической информационной копии на модели клеток мозга хорька с помощью потенциал-чувствительного флуоресцентного зонда. Биомедицинская радиоэлектроника, 2013, № 5, с. 28-34. @@Morozova G.I., Lopatina O.A., Mikhailova G.R., Danlybaeva G.A., Podchernyaeva R.Ya.Comparative study of the frequency-resonance and holographic information copy effects on ferret brain cells as model using a potential-sensitive fluorescent probe. Biomedicine Radioengineering, 2013, no. 5, pp. 28-34. (In Russ)
12. Морозова Г.И., Корнилаева Г.В., Подчерняева Р.Я., Куленич Т.М., Боженко В.К. Исследование влияния КВЧ-излучения миллиметрового диапазона на мембранные структуры в культуре Т-лимфобластоидных клеток с помощью флуоресцентного зонда-катиона ДСМ. Биомедицинская радиоэлектроника, 2014, № 11, с. 31-38. @@Morozova G.I., Kornilaeva G.V., Podchernyaeva R.Ya., Kulenich T.M., Bozhenko V.K. Study of influence millimeter-wave EHF- irradiation on membrane structures of the T-lymphoblastoid cells culture using a fluorescent probe- cation DSM. Biomedicine Radioengineering, 2014, no. 11, pp. 31-38. (In Russ.)
13. Морозова Г.И., Козлова М.А., Акшинцев А.А. Оценка экологической токсичности водных растворов ксенобиотиков в малых дозах на клетках донорской крови c помощью потенциал-чувствительного флуоресцентного зонда. Актуальные вопросы биологической физики и химии, 2019, т. 4, № 3, с. 428-424. @@Morozova G.I., Kozlova M.A., Akshintsev A.A. Evaluation of the ecological toxicity of aqueous solutions with low xenobiotics doses on donor blood cells using a potential-seneitive fluorescent probe. Aktualnye voprosy biologicheskoj fiziki i himii, 2019, vol. 4, no. 3, pp. 428-424 (In Russ)
14. Askarova K.Z., Morozova G.I., Anoshin A.A. Modeling the Accumulation Kinetics of Anionic Photo-sensitizers in Tumor Cells with Different Trans-membrane Potentials. J. Mech.Cont.& Math. Sci., Special Issue-1, March, 2019, pp. 483-490.
15. Cкулачев В.П. Энергетика биологических мембран. М: Наука, 1989, 123 c. @@Skulachev V. P. Energy of biological membranes. M.: Science, 1989, 123 p. (In Russ.)
16. Морозова Г.И., Полетаев А.И., Борщевская Т.А. Инвертированный электрохимический потенциал на ядерной мембране клеток и его связь с клеточной энергетикой. Сборник докладов 2-го съезда биофизиков России. М.: 1999, с. 256-257. @@Morozova G.I., Poletaev A.I., Borschevskaya T.A. Inverted electrochemical potential on the nuclear membrane of cells and its relationship with cellular energy. Reports of the 2nd Russia biophysicists Congress. M.: 1999, pp. 256-257. (In Russ.)
17. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов. М.: Наука, 1989, 277 с. @@Dobretsov G. E. Fluorescent probes in the study of cells, membranes and lipoproteins. M.: Science, 1989, 277 p. (In Russ.)
18. Бейли И.Н. Статистические методы в биологии. М.: Наука, 1963, 277 с. @@Bailey I.N. Statistical methods in biology. M.: Science, 1963, 277 p. (In Russ.)
19. Кжышковска Ю.Г, Стахеева М.Н., Литвяков Н.В. и др. Иммунная система и эффективность ротивоопухолевого лечения. Томск: издательство ТГУ, 2015, 130 с. @@Kzhyshkovska Yu.G., Stakheeva М.N., Litviakov N.V. et al. Immune system and the effectiveness of anticancer treatment.Tomsk: University Publishing House, 2015, 130 p. (In Russ.)
