Владивосток, Приморский край, Россия
Владивосток, Приморский край, Россия
Владивосток, Приморский край, Россия
Выделены и очищены липополисахарид-связывающие белки из двух массовых видов медуз Aurellia аurita и Ropelema asamushi и изучено взаимодействие липополисахаридов (ЛПС) разных структурных типов с ЛСБ. Ингибированием взаимодействия установлено, что оба белка специфически связываются с липидным и коровым фрагментами молекулы ЛПС. В ЛСБ присутствует два типа сайтов связывания с Кd = 3,28×10-6 М и Кd = 0,13×10-6 М (для белка из A. aurita) и Kd= 3,66 × 10-6 M и Kd = 0,27 × 10-6 M (для белка из R. asamushi). Методом динамического рассеяния света показано, что связывание ЛСБ с R-ЛПС приводит к диссоциации мицелл ЛПС. Размеры агрегатов ЛПС уменьшаются с 200 нм до 25-30 нм в составе комплексов ЛПС-ЛСБ. Данные электрокинетических измерений указывают на нейтрализацию отрицательного заряда R-ЛПС (-42,2 мВ) в комплексе ЛПС-ЛСБ- R. asamushi до -4,4 мВ. Мицеллы S-ЛПС из E. coli не дезагрегируют при связывании с ЛСБ, что, по-видимому, связано с экранированием липида А О-специфическими цепями в молекуле S-ЛПС. Связывание ЛПС с ЛСБ может оказывать влияние на их эндотоксические свойства.
липополисахаид, липополисахарид связывающие белки, параметры связывания, дезагрегация
1. Iwanaga S., Lee B.L. Recent advances in the innate immunity of invertebrate animals. J. Biochem. Mol. Biology, 2005, vol. 38, pp.128-150, doi:https://doi.org/10.5483/bmbrep.2005.38.2.128.
2. Warren H.S., Glennon M.L. et al. Binding and Neutralization of Endotoxin by Limulus Antilipopolysaccharide Factor. Infect. Immun., 1992, vol. 60, pp. 2506-2513, doi:https://doi.org/10.1128/iai.60.6.2506-2513.1992.
3. Saito T., Kawabata S.I., Shigenaga T., Takayenoki Y., Cho J., Nakajima H., Hirata M., Iwanaga S. A Novel Big Defensin Identified in Horseshoe Crab Hemocytes: Isolation, Amino Acid Sequence, and Antibacterial Activity. J. Biochem., 1995, vol. 117, pp. 131-1137.
4. Tobias P.S., Mathison J.C., Ulevitch R.J. A family of lipopolysaccharide binding proteins involved in responses to Gram-negative sepsis. J. Biol. Chem., 1988, vol. 263, pp. 13479-13481.
5. Amparyup P., Sutthangkul J., Charoensapsri W., Tassanakajon A. Pattern recognition protein binds to lipopolysaccharide and β-1,3-glucan and activates shrimp prophenoloxidase system. J Biol Chem., 2016, vol. 291, no. 20, p. 10949, doi:https://doi.org/10.1074/jbc.A111.294744.
6. Бахолдина С.И., Набережных Г.А, Горбач В.И., Исаева М.П., Соловьева Т.Ф. Морские беспозвоночные Охотского моря как новые источники липополисахарид связывающих белков. Биология моря, 2014, т. 40, № 1, с. 63-69, doi:https://doi.org/10.1134/S106307400906008X
7. Ovchinnikova T.V, Balandin S.V., Aleshina G.M., Tagaev A.A., Leonova Y.F., Krasnodembsky E.D., Men’shenin A.V., Kokryakov V.N. Aurelin, a novel antimicrobial peptide from jellyfish Aurelia aurita with structural features of defensins and channel-blocking toxins. Biochem. Bioph. Res. Com., 2006, vol. 348, pp. 514-523, doi:https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2006.07.078.
8. Naberezhnykh G.A. New Lipopolysaccharide Binding Proteins from the Jellyfises Aurelia аurita and Rhopilema аsamushi of Sea of Japan. J Marine Biol Aquacult., 2017, vol. 3, no. 2, pp. 1-5.
9. Andra J., Howe J., Garidel P., Rossle M., Richter W., Leiva-Leon J., Moriyon I., Bartels R., Gutsmann T., Brandenburg K. Mechanism of interaction of optimized Limulus-derived cyclic peptides with endotoxins: thermodynamic, biophysical and microbiological analysis. Biochem. J., 2007, vol. 406, pp. 297-307, doi:https://doi.org/10.1042/BJ2007027936.
10. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for quatitation of microgram quantities of proteins utilizing the principle of protein dye binding. Anal. Biochem., 1976, vol. 72, pp. 248-534, doi:https://doi.org/10.1006/abio.1976.9999.
11. Galanos O. Luderitz О., Westphal O. A new method for the extraction of R lipopolysaccharides. Eur. J. Biochem., 1969, vol. 9, pp. 245-249, doi:https://doi.org/10.1111/j.1432-1033.1969.tb00601.x.
12. Hogg P.J, Johnston S. Caluation of equilibrium constants for antigen-antibody interactions by solid-phase in imunoassay: the binding of paraquat to its elicited mouse monoclonal antibody. Mol. Imunol., 1987, vol. 24, pp. 797-801, doi:https://doi.org/10.1016/0161-5890(87)90064-2.
13. Chen Y.-Y., Chen J.-C., Kuo Y.-H., Lin Y.-C., Chang Y.-H., Gong H.-Y., Huang C.-L. Lipopolysaccharide and b-1,3-glucan-binding protein (LGBP) bind to seaweed polysaccharides and activate the prophenoloxidase system in white shrimp Litopenaeus vannamei. Develop. Comp. Immunol., 2016, vol. 55, pp. 144-151, doi:https://doi.org/10.1016/j.dci.2015.10.023.
