С целью создания субъединичной вакцины против распространенного и смертельно опасного вирусного заболевания - клещевого энцефалита наиболее целесообразным представляется использование III домена белка Е вируса клещевого энцефалита (ВКЭ), включающего основные эпитопы нейтрализации вируса, и прилегающей к нему С-концевой цепочки белка Е, состоящей из ножки и гидрофобного якоря, необходимого для инкорпорирования белка в созданный нами адъювантный наноноситель антигенов - тубулярный иммуностимулирующий комплекс (ТИ-комплекс). Для получения двух фрагментов белка Е: III домена и III домена с ножкой и гидрофобным якорем была использована экспрессионная система Escherichia coli и бесклеточная система. Показано, что гидрофобный якорь, токсичный для бактерии, разрушается после синтеза в клетке. Однако в бесклеточной среде фрагмент белка Е с гидрофобным якорем был успешно экспрессирован. Иммунизация мышей полученными антигенами как в составе ТИ-комплексов, так и без них показала отсутствие иммуногенности III домена, тогда как III домен с ножкой и гидрофобным якорем в 2 раза эффективнее стимулировал выработку антител по сравнению с контролем. Инкорпорирование этого рекомбинантного белка в ТИ-комплексы приводило к дальнейшему повышению иммуногенности антигена в 1.5 раза. Полученные результаты будут использованы для поиска более эффективных форм С-концевого домена белка Е для получения оптимальной вакцинной конструкции на основе ТИ-комплексов.
экспрессионные системы, субъединичные белки, адъювантный наноноситель антигена
1. Kovalev S.Y., Kokorev V.S., Belyaeva I.V. Distribution of Far-Eastern tick-borne encephalitis virus subtype strains in the former Soviet Union. J. Gen. Virol., 2010, vol. 91, pp. 2941-2946.
2. Санина Н.М., Попов А.М., Ли И.А., Костецкий Э.Я., Цыбульский А.В., Шныров В.Л. Способ получения носителя антигенов на основе липидов из морских макрофитов и тритерпенового гликозида кукумариозида. Патент РФ 2319506. Приоритет - 12 октября 2005. [Sanina N.M., Popov A.M., Lee I.A., Kostetsky E.Y. et al. Mode of forming of antigen carrier based on lipids from marine macrophytes and triterpene glycoside cucumarioside. Patent of Russian Federation 2319506. Priority - October 12, 2005. (In Russ.)]
3. Sanina N.M., Kostetsky E.Y., Shnyrov V.L., Tsybulsky A.V., Novikova O.D., Portniagina O.Y., Vorobieva N.S., Mazeika A.N., Bogdanov M.V. The influence of monogalactosyldiacylglycerols from different marine macrophytes on immunogenicity and conformation of protein antigen of tubular immunostimulating complex. Biochimie, 2012, vol. 94, pp. 1048-1056.
4. Vorobyeva N.S., Mazeika A.N., Davydova L.A., Velansky P.V., Tsybulsky A.V., Kostetsky E.Y., Sanina N.M. The effects of triterpene glycosides and phospholipids from marine invertebrates in the composition of tubular immunostimulating complexes on the immunogenicity of human cerum albumin. Russian Journal of Marine Biology, 2015, vol. 41, pp. 69-77.
5. Rey F.A., Heinz F.X., Mandl C., Kunzt C., Harrison S.C. The envelope glycoprotein from tick-borne encephalitis virus at 2A resolution. Nature, 1995, vol. 375, pp. 291-298.
6. Kiermayr S., Stiasny K., Heinz F.X. Impact of quaternary organization on the antigenic structure of the tick- borne encephalitis virus envelope glycoprotein E. J.Virol., 2009, vol. 83, pp. 8482-8491.
7. Schneider B., Junge F., Shirokov V.A., Durst F., Schwarz D., Dötsch V., Bernhard F. Membrane protein expression in cell-free systems. Methods Mol. Biol., 2010, vol. 601, pp. 165-186.
8. Kostetsky E.Y., Sanina N.M., Mazeika A.N., Tsybulsky A.V., Vorobyeva N.S., Shnyrov V.L. Tubular immunostimulating complex based on cucumarioside A2-2 and monogalactosyldiacylglycerol from marine macrophytes. J. Nanobiotechnology, 2011, vol. 9, no. 35.
9. Lyukmanova E.N., Shenkarev Z.O., Khabibullina N.F., Kopeina G.S., Shulepko M.A., Paramonov A.S., Mineev K.S., Tikhonov R.V., Shingarov L.N., Petrovskaya L.E., Dolgikh D.A., Arseniev A.S., Kirpichnikov M.P. Lipid-protein nanodiscs for cell-free production of integral membrane proteins in a soluble and folded state: Comparison with detergent micelles, bicelles and liposomes. Biochim. Biophys. Acta, 2011, vol. 1818, pp. 349-358.
