Данная работа посвящена исследованию взаимодействие белка из семейства ЕВ (End Binding protein) с микротрубочками (МТ) in vitro . Согласно одной из гипотез, он имеет повышенное сродство к комплексу «тубулин-ГДФ-фосфат», откуда следует, что повышение концентрации неорганического фосфата в растворе должно увеличить аффинность EB1 к МТ. Чтобы проверить данное предположение, проведены эксперименты по наблюдению кинетики накопления рекомбинантного белка ЕВ1-еGFP на стабильных МТ с помощью TIRF микроскопии (Total Internal Reflection Fluorescence) в присутствии таксола, подавляющего деполимеризацию МТ. Так же произведены измерения динамических параметров МТ и размера области связывания ЕВ1-еGFP с динамическими МТ. Сравнивая эти данные, полученные при разной концентрации дигидрофосфата натрия в растворе, можно делать выводы о влиянии фосфата на аффинность ЕВ1 к МТ, а значит, и о механизме их взаимодействия. Результаты исследования свидетельствуют против гипотезы о том, что EB1 связывается с ГДФ-фосфат-тубулином
микротрубочки, ГТФ-шапочка, ЕВ
1. Komarova Y. [et al.] Mammalian end binding proteins control persistent microtubule growth. J.Cell Biol., 2009, vol. 184, pp. 691-706.
2. Maurer S.P., Fourniol F.J., Bohner G., Moores C.A., Surrey T. EBs recognize a nucleotide-dependent structural cap at growing microtubule ends. Cell, 2012, vol. 149(2), pp. 371-382.
3. Maurer S.P., Cade N.I., Bohner G., Gustafsson N., Boutant E. Surrey T. EB1 accelerates two conformational transitions important for microtubule maturation and dynamics. Current Biology: CB, 2014, 24(4), pp. 372-384.
4. Maurer S.P., Bieling P., Cope J., Hoenger A., Surrey T. GTPγS microtubules mimic the growing microtubule end structure recognized by end-binding proteins (EBs). Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2011, vol. 108(10), pp. 3988-3993.
5. Zhang R., Alushin G.M., Brown A., Nogales E. Mechanistic Origin of Microtubule Dynamic Instability and Its Modulation by EB Proteins. Cell, 2015, vol. 162(4), pp. 849-859.
6. Zaytsev A.V., Mickb J.E., Maslennikov E., Nikashina B., DeLucab J.G., Grishchuk E.L. Multisite phosphorylation of the NDC 80 complex gradually tunes its microtubule-binding affinity. Molecular Biology of the Cell, 2015, vol. 26, pp. 1829-44.
