Изучено влияние амилоидных фибрилл на структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов человека in vitro . Контроль за процессом образования амилоидных фибрилл из лизоцима куриного яйца осуществляли флуоресцентным методом с использованием тиофлавина Т. Эксперименты проведены на эритроцитах крови практически здоровых доноров. Клетки инкубировали в растворе, содержащем амилоидные фибриллы, затем из них выделяли изолированные эритроцитарные мембраны. О структурном состоянии мембран эритроцитов человека судили по степени везикуляции клеток при их метаболическом истощении, модификацию белков эритроцитарных мембран оценивали по параметрам флуоресценции зондов N-(1-пирен) малеимида (ПМ), отражающего уровень сульфгидрильных групп, и 4-4,-диацетамидо-2,2,-стильбендисульфоната (ДИДС), специфически связывающегося с белком полосы 3. В качестве контролей использовали эритроциты, проинкубированные при таких же условиях в среде, содержащей нативный лизоцим, а также в среде, не содержащей белковых компонентов. Обнаружено, что трехчасовая инкубация клеток в растворе, содержащем амилоидные фибриллы из лизоцима, приводит к ускорению процесса везикуляции эритроцитов при их метаболическом истощении, снижению интенсивности флуоресценции специфического к SH-группам белков N-1-(пирен) малеимида и связанного с белком полосы 3 4-4,-диацетамидо-2,2,-стильбендисульфоната, по сравнению с контрольными клетками. Полученные результаты позволяют сделать вывод, что амилоидные фибриллы, полученные из лизоцима, воздействуя на эритроциты человека in vitro , вызывают модификацию структурного состояния их мембран, проявляющуюся в повышении отделения от эритроцитов части мембранного материала - везикул, снижении уровня белковых SH-групп и модификации структурного состояния белка полосы 3 в мембранах эритроцитов человека.
эритроциты, амилоидные фибриллы, лизоцим, мембранные белки
1. Шавловский М.М. Молекулярные и генетические основы этиопатогенеза амилоидозов. Медицинский академический журнал, 2010, т. 10, № 4, с. 63-81. @@[Schavlovsky M.M. Ethiology and pathogenesis of amyloidoses: the molecular and genetic basis. Med. Acad. Journ., 2010, vol. 10, no. 4, pp. 63-81. (In Russ.)]
2. Chiti F., Dobson C. Protein misfolding, amyloid formation, and human disease: a summary of progress over the last decade. Annu. Rev. Biochem., 2017, vol. 86, pp. 27-68.
3. Swaminathan R., Ravi V.K., Kumar S., Kumar M.V., Chandra N. Lysozyme: a model protein for amyloid research. Adv Protein Chem Struct Biol., 2011, vol. 84, pp. 63-111.
4. Zou Y., Hao W., Li H., Gao Y., Sun Y., Ma G. New insight into amyloid fibril formation of hen egg white lysozyme using a two-step temperature-dependent FTIR approach. J. Phys. Chem. B, 2014, vol. 118, no. 33, pp. 9834-9843.
5. Fazili N.A., Bhat I.A., Bhat W.F., Naeem A. Аnti-fibrillation propensity of a flavonoid baicalein against the fibrils of hen egg white lysozyme: potential therapeutics for lysozyme amyloidosis. J Biomol Struct Dyn., 2016, vol. 34, no. 10, pp. 2102-14.
6. Dodge G.T., Mitchell C., Hanahan D.J. The preparation and chemical characteristics of hemoglobin-free ghosts of human erythrocytes. Arch. Biochem. Biophys., 1963, vol. 100, pp. 119-130.
7. Markwell M.A., Haas S.M., Tolbert N.E. A modification of the Lowry procedure to simplify protein determination in membrane and lipoprotein sample. Analyt. Biochem., 1978, vol. 87, no. 2, pp. 206-210.
8. Зубрицкая Г.П., Лукьяненко Л.М., Слобожанина Е.И., Козарезова Т.И., Климкович Н.Н. Процессы микровезикуляции эритроцитов у детей при гематологических заболеваниях. Новости медико-биол. наук, 2004, № 1, с. 143-146. @@[Zubritskaya G.P., Lukyanenko L.M., Slobozhanina E.I., Kozarezova T.I., Klimkovich N.N. Microvesicular process in erythrocytes of children with aplastic anemia and myelodysplastic syndrome. News of biomedical sciences, 2004, no. 1, pp. 143-146. (In Russ.)]
9. LeVine H. Thioflavine T interaction with synthetic Alzheimer's disease beta-amyloid peptides: detection of amyloid aggregation in solution. Protein Sci., 1993, vol. 2, no. 3, pp. 404-410.
